靶向超声造影剂介导Gα_(i2) C-terminal peptide去迷走神经治疗心房颤动的实验研究

【摘要】目的：1)研究制备携Gαi2C-terminalpeptide(Gαi2ctp)靶向超声造影剂的可行性；2)建立犬迷走神经介导的阵发性房颤的动物模型,探讨迷走神经兴奋对心房不同部位电生理特性以及房颤诱发和维持的影响；通过研究靶向转导Gαi2ctp去迷走神经后心房不同部位电生理特征以及房颤诱发和维持情况的变化,探讨去迷走神经治疗心房颤动的电生理机制；3)探讨靶向转导Gαi2ctp去迷走神经治疗心房颤动可能的分子机制。方法：1)将磺化罗丹明标记的Gαi2ctP按照剂量大小分为三组,以声诺维(SonoVue)为载体,通过直接连接法,制备携Gαi2ctP靶向超声微泡造影剂,并检测三组微泡大小、连接效率、稳定性及靶向性。2)健康成年家犬14只(14-23kg)随机分为两组：对照组(n=7),给予单纯的超声微泡造影剂；实验组(n=7)给予携Gαi2ctp靶向超声造影剂。通过颈部迷走神经干刺激加快速心房起搏的方法建立迷走神经介导的犬急性房颤模型,测定两组犬心房和肺静脉不同部位的房颤诱发率,探讨迷走神经兴奋对房颤诱发和维持的影响；分别通过心内电生理标测观察两组犬心房和肺静脉的有效不应期(ERP)、ERP离散度(dERP)、ERP频率适应性以及两组犬心房和肺静脉不同部位的房颤诱发率,探讨去迷走神经治疗心房颤动的电生理机制；3)采用免疫组化和免疫荧光技术检测犬心房和肺静脉不同部位Gαi2ctP的表达；采用Westernblot的方法测定心房和肺静脉不同部位Gαi2ctp的蛋白质水平的表达情况；采用RT-PCR技术测定实验组和对照组犬心房和肺静脉不同部位Gai2ctp的mRNA的表达情况的变化；采用ELISA法测定实验组和对照组犬左心房cAMP含量的变化,探讨靶向转导Gαi2ctp去迷走神经治疗心房颤动的可能的分子机制。结果：1)声诺维和磺化罗丹明标记的Gαi2ctp可以稳定结合,以Gαi2ctp为1.5mg/1的剂量为最佳；制备的造影剂在荧光显微镜下可激发出橙红色荧光；流式细胞仪定量检测结果显示,1.5mg/1组Gαi2ctp微泡造影剂在不同静置时间携带率均为最高,静置0.5小时、1小时、2小时的携带率最高,分别是：93.07±4.59%,93.60±7.35%,96.52±3.35%,而且其携带率随时间的延长并未发生衰减：体内评价发现荧光显微镜下实验组犬左心房及肺静脉可见橙红色荧光,而对照组无荧光物质聚集。2)通过颈部迷走神经干刺激加心房不同部位快速心房起搏的方法成功制作了迷走神经介导的犬急性房颤模型；迷走神经刺激可显著缩短心房及肺静脉不同部位的ERP,增加dERP,从而增加房颤的诱发率；与对照组相比较,实验组左心房靶向转导Gαi2ctp0.5h、1h、2h后LA、LSPV、LIPV的ERP显著延长,差异有统计学意义(P<0.05),RA、RSPV、RIPV的ERP轻度延长或缩短,但差异无统计学意义：实验组左心房靶向转导Gαi2ctp后心房各部位dERP显著减少(P<0.05),ERP频率适应性增加(P<0.05)；房颤诱发率下降。3)犬心房及肺静脉不同部位均存在Gαi2ctp的表达,靶向转导外源性的Gαi2ctp可以阻止Gαi介导的信号传导通路,从而影响下游通路中cAMP的含量,减少迷走神经介导的房颤发生。结论：应用直接连接法可以成功制备携Gαi2ctp靶向超声微泡造影剂。颈部迷走神经干刺激加快速心房起搏可建立迷走神经介导的犬急性房颤模型。迷走神经电刺激使心房及肺静脉各部位的房颤诱发率显著升高。应用直接连接法制备的携Gαi2ctp靶向超声微泡造影剂具有靶向性,能成功地在左心房定向爆破,作用于Gai蛋白C-末端肽结构,阻止Gai介导的信号传导通路,从而选择性干扰迷走神经兴奋性,达到“药物去迷走神经的作用”,减少迷走神经介导的房颤发生。
【作者】蒋华；
【导师】汤宝鹏；
【作者基本信息】新疆医科大学，内科学（专业学位），2013，博士
【关键词】心房颤动；迷走神经；Gαi2C-teminalpeptide；靶向超声造影剂；

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